Teurimong geunaseh ka neukunjong bak nature.com. Versi browser nyang neungui na dukungan CSS nyang teubatah. Keu pengalaman nyang paleng jroh, kamoe meusarankan neungui versi browser nyang paleng baro (atau neupeumate mode kompatibilitas lam Internet Explorer). Seulaén nibak nyan, keu tapeugot dukungan sabe, situs nyoe hana akan geupeutamong gaya atawa JavaScript.
Hidrogen sulfida (H2S) na le that efek fisiologis ngon patologis bak tuboh manusia. Natrium hidrosulfida (NaHS) le that geungui seubagoe alat farmakologi keu geuevaluasi efek H2S lam eksperimen biologis. Meskipun gadeh H2S dari larutan NaHS hanya memerlukan watee padum-padum minet, larutan NaHS kaleuh dipakek seubagoe senyawa donor untuk H2S lam ie jiep lam padum-padum boh penelitian binatang. Penelitian nyoe menyelidiki peu ie jiep ngen konsentrasi NaHS 30 μM nyang disiapkan lam botol tikoh/tikoh jeut teutap stabil setidak jih 12-24 jeum, lagee nyang disarankan le padum-padum droe penuleh. Siapkan larutan NaHS (30 μM) lam ie jiep dan langsong ta rôh lam botol ie tikus/tikoh. Sampel dicok dari ujong dan bagian dalam botol ie bak 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 12 dan 24 jam untuk diuko kandungan sulfida deungon cara methylene blue. Seulaen nyan, tikoh agam ngon inong geusuntik NaHS (30 μM) seulama dua minggu dan konsentrasi sulfida serum geu uko tiep uroe laen lam minggu phon dan bak akhe minggu keudua. Larutan NaHS lam sampel nyang dipeugot dari ujong botol ie hana stabil; nyan meunuron 72% ngon 75% lheuh 12 ngon 24 jeum. Lam sampel nyang dipeugot dari dalam botol ie, penurunan NaHS hana signifikan lam watee 2 jeum; bah pih meunan, ka meukureuëng 47% ngon 72% lheuëh 12 ngon 24 jeuëm. Suntikan NaHS hana meupeungaroh bak kadar sulfida serum bak tikoh agam ngon inong. Kesimpulan jih, larutan NaHS nyang disiapkan dari ie jiep hana jeut dipakek untuk donasi H2S kareuna larutan nyan hana stabil. Jalur pemberian nyoe akan geupeudeuh binatang keu jumlah NaHS nyang hana teratur dan leubeh ubeut dari nyang diharapkan.
Hidrogen sulfida (H2S) ka geungui seubagoë racon sejak thôn 1700; namun, kemungkenan peran jih seubagoe molekul biosinyal endogen dijelaskan oleh Abe ngon Kimura bak thon 1996. Selama lhee dekade teurakhe, le fungsi H2S lam berbagai sistem manusia kaleuh dijelaskan, nyang mengarah bak kesadaran bahwa molekul donor H2S mungken na aplikasi klinis cerita lam pengobatan; eu Chirino dkk. keu ulasan baroe.
Natrium hidrosulfida (NaHS) kaleuh ji pakek seucara luah seubagoe alat farmakologis keu ji nilai efek H2S lam le kultur sel ngon penelitian binatang5,6,7,8. Namun, NaHS kon donor H2S nyang ideal kareuna bagah diubah jeut keu H2S/HS- lam larutan, mudah terkontaminasi deungon polisulfida, ngon mudah teroksidasi ngon terwuar4,9. Lam le eksperimen biologis, NaHS terlarut lam ie, menghasekan volatilisasi pasif ngon gadeh H2S10,11,12, oksidasi spontan H2S11,12,13, ngon fotolisis14. Sulfida lam larutan asli jih gadeh that bagah kareuna volatilisasi H2S11. Lam saboh wadah nyang teubuka, umu sitengeh (t1/2) H2S nakeuh kira-kira 5 minet, ngon konsentrasi jih meunuron kira-kira 13% per minet10. Meskipun gadeh jih hidrogen sulfida dari larutan NaHS hanya memerlukan watee padum-padum minet, padum-padum boh penelitian binatang kaleuh geupake larutan NaHS seubagoe sumber hidrogen sulfida lam ie jiep seulama 1-21 minggu, geugantoe larutan nyang mengandung NaHS tiep 12-24. jam.15,16,17,18,19,20,21,22,23,24,25,26 Praktek nyoe hana sesuai ngon prinsip penelitian ilmiah, kareuna dosis ubat harus didasarkan bak penggunaan jih bak spesies laen, terutama manusia.27
Penelitian praklinikal lam biomedis bertujuan keu geupeugot kualitas perawatan pasien atawa hasee pengobatan. Namun, hasee dari sebagian rayeuk penelitian binatang golom diterjemahkan keu manusia28,29,30. Salah saboh alasan kegagalan translasi nyoe adalah kureung perhatian keu kualitas metodologis studi binatang30. Kareuna nyan, tujuan dari penelitian nyoe nakeuh untuk menyelidiki peu larutan NaHS 30 μM nyang disiapkan lam botol ie tikoh/tikoh jeut teutap stabil lam ie jiep seulama 12-24 j, lagee nyang diklaim atawa disarankan lam padum-padum boh penelitian.
Mandum eksperimen lam penelitian nyoe dipeuget sesuai ngen pedoman yang dipeuteubit untuk perawatan dan penggunaan binatang laboratorium di Iran31. Mandum laporan eksperimen lam penelitian nyoe pih geuikot pedoman ARRIVE32. Komite Etika Institut Ilmu Endokrin, Universitas Ilmu Kedokteran Shahid Beheshti, geuseutujoe mandum prosedur eksperimen lam penelitian nyoe.
Seng asetat dihidrat (CAS: 5970-45-6) ngon klorida besi anhidrat (CAS: 7705-08-0) geubloe bak Biochem, Chemopahrama (Cosne-sur-Loire, Prancih). Natrium hidrosulfida hidrat (CAS: 207683-19-0) ngon N,N-dimetil-p-fenilendiamin (DMPD) (CAS: 535-47-0) geubloe bak Sigma-Aldrich (St. Isoflurane nyan geubloe bak Piramal (Betlehem, PA, Amerika Serikat). Asam klorida (HCl) geubloe bak Merck (Darmstadt, Jerman).
Siapkan larutan NaHS (30 μM) lam ie jiep dan langsong ta rôh lam botol ie tikus/tikoh. Konsentrasi nyoe geupiléh berdasarkan le publikasi nyang geungui NaHS seubagoe sumber H2S; eu bak bagian Diskusi. NaHS nakeuh molekul hidrasi nyang jeuet meuasoe jumlah ie hidrasi nyang meubida-bida (yaitu, NaHS•xH2O); meunurot pabriek, persentase NaHS nyang geungui lam penelitian kamoe nakeuh 70,7% (yaitu, NaHS•1,3 H2O), dan kamoe meuhitong nilai nyoe lam perhitungan kamoe, dipat kamoe pakek berat molekul 56,06 g/mol, nyang merupakan berat molekul NaHS anhidrat. Ie hidrasi (dikheun cit ie kristalisasi) nakeuh molekul ie nyang membentuk struktur kristal33. Hidrat na sipheuet fisik ngon termodinamik nyang beda dibandengkan deungon anhidrat34.
Sigohlom ta tamah NaHS lam ie jiep, ta uko pH ngon suhu pelarut. Langsong ta rôh larutan NaHS lam botol ie tikus/tikoh lam sangkar binatang. Sampel dicok dari ujong dan dari dalam botol ie bak 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 12, dan 24 h untuk diuko kandungan sulfida. Pengukuran sulfida dicok segera lheuh tiep-tiep pengambilan sampel. Kamoe meurumpok sampel dari ujong tabung kareuna na padum-padum boh penelitian ka geupeuleumah bahwa ukuran pori-pori ubeut tabung ie jeut meminimalkan penguapan H2S15,19. Masalah nyoe deuh jih berlaku keu larutan lam botol cit. Namun, nyoe hana terjadi keu larutan lam takue botol ie, nyang na laju penguapan nyang leubeh tinggi dan autoksidasi; padahai, binatang-binatang nyan jieb ie nyoe dilee.
Tikoh Wistar agam ngon inong nyang dipakek lam penelitian nyan. Tikoh nyan jipeuduek lam sangkar polipropilena (2-3 tikoh per sangkar) lam kondisi standar (suhu 21-26 °C, kelembaban 32-40%) ngon 12 j cahaya (7 beungoh sampoe 7 malam) ngon 12 j seupot (7 beungoh sampoe 7 beungoh). Tikoh nyan na akses bebas keu ie kran dan geubri makan ngon chow standar (Perusahaan Pars Bendungan Khorak, Teheran, Iran). Tikoh Wistar nyang cocok ngon umu (6 buleuen) inong (n=10, brat tuboh: 190-230 g) ngon agam (n=10, brat tuboh: 320-370 g) geubagi secara acak jeut keu kelompok kontrol ngon NaHS (30 μM) nyang geurawat (n=5 per kelompok). Untuk tapeuteunte ukuran sampel, kamoe pakek pendekatan KISS (Keep It Simple, Stupid), nyang meugabongkan pengalaman seugolom jih dan analisis daya35. Kamoe phon that kamoe peugot penelitian percontohan bak 3 boh tikoh dan kamoe peuteunte rata-rata kadar sulfida total serum dan standar deviasi (8,1 ± 0,81 μM). Teuma, tapeutimang daya 80% ngon tapeuanggap tingkat signifikansi 5% dua boh sagoe, kamoe tapeuteunte ukuran sampel awai (n = 5 berdasarkan literatur seugolom jih) nyang sesuai ngon ukuran efek standar 2,02 ngon nilai nyang kaleuh dipeuteunte nyang disarankan le Festing untok meuhitong ukuran sampel binatang eksperimental3. Lheueh geukalikan nilai nyoe ngon SD (2,02 × 0,81), ukuran efek nyang jeuet jideteksi nyang jiprediksi (1,6 μM) nakeuh 20%, nyang jeuet jiteurimong. Nyoe berarti n = 5/kelompok cukop untuk mendeteksi perubahan rata-rata 20% antar kelompok. Tikoh geubagi secara acak jeut keu kelompok kontrol ngon kelompok nyang geurawat NaSH ngon geupake fungsi acak dari perangkat lunak Excel 36 (Gambar Tambahan 1). Pembutaan dipeuget bak tingkat hasee, dan awak peunyelidik yang dipeuget pengukuran biokimia hana sadar akan tugas keulompok.
Keulompok NaHS dari bandua jeuneh keulamin geurawat ngon larutan NaHS 30 μM nyang geupeugot lam ie jiep seulama 2 minggu; Larutan segar geubri tiep 24 j, lam watee nyan geu uko brat tuboh. Sampel darah geucok dari ujong ikue mandum tikoh nyang diyub bius isoflurane tiep uroe laen bak akhe minggu phon ngon keudua. Sampel darah disentrifugasi bak 3000 g seulama 10 minet, serum dipisah dan disimpan bak suhu –80°C untuk pengukuran urea serum, kreatinin (Cr), dan total sulfida selanjut jih. Urea serum geu peutente ngon cara urease enzimatik, dan kreatinin serum geu peutente ngon cara fotometrik Jaffe geu pakek kit nyang na bak pasai (Perusahaan Man, Teheran, Iran) dan alat analisis otomatis (Selectra E, nomor seri 0-2124, Belanda). Koefisien variasi intra- ngon interassay keu urea ngon Cr kureung dari 2,5%.
Metode biru metilen (MB) geungui keu geu uko total sulfida lam ie jiep ngon serum nyang na NaHS; MB adalah metode yeng paleng umum dipakek untuk meuko sulfida lam larutan massal ngen sampel biologis11,37. Metode MB jeuet geungui keu geukira jumlah kolam sulfida38 ngon geu uko sulfida anorganik lam bentuk H2S, HS- ngon S2 lam fase ie39. Lam cara nyoe, belerang dipeuendap seubagoe seng sulfida (ZnS) deungon na seng asetat11,38. Precipitasi seng asetat adalah metode yeng paleng le dipakek untuk meupisah sulfida dari kromofor laen11. ZnS dipeularut lom deungon dipakek HCl11 lam kondisi nyang that asam. Sulfida bereaksi deungon DMPD lam rasio stoikiometri 1:2 lam reaksi nyang dikatalisis le besi klorida (Fe3+ bertindak seubagoe bahan oksidasi) untuk membentuk peuwarna MB, nyang dideteksi seucara spektrofotometri bak 670 nm40,41. Batas deteksi dari metode MB nakeuh kira-kira 1 μM11.
Lam penelitian nyoe, 100 μL dari tiep-tiep sampel (larutan atawa serum) dipeutamah lam saboh tabung; lheuh nyan 200 μL seng asetat (1% w/v lam ie suling), 100 μL DMPD (20 mM lam HCl 7,2 M), ngon 133 μL FeCl3 (30 mM lam HCl 1,2 M) geutamah. Campuran nyan geu inkubasi bak suhu 37°C lam seupôt seulama 30 min. Larutan nyan geusentrifugasi bak 10.000 g seulama 10 min, ngon absorbansi supernatan geubaca bak 670 nm ngon geungui alat baca mikroplat (BioTek, MQX2000R2, Winooski, VT, Amerika Serikat). Konsentrasi sulfida geupeuteuntèe ngon geungui kurva kalibrasi NaHS (0-100 μM) lam ddH2O (Gambar Tambahan 2). Mandum larutan nyang dipakek untuk pengukuran baroe disiapkan. Koefisien variasi intra- ngon interassay keu pengukuran sulfida maseng-maseng 2,8% ngon 3,4%. Kamoe pih meuteumee jumlah sulfida nyang dipeugot dari sampel ie jiep ngon serum nyang mengandung natrium tiosulfat deungon cara sampel nyang diperkuat42. Pemulihan keu sampel ie jiep ngon serum nyang na natrium tiosulfat nakeuh 91 ± 1,1% (n = 6) ngon 93 ± 2,4% (n = 6).
Analisis statistik geupeugot ngon geungui perangkat lunak GraphPad Prism versi 8.0.2 keu Windows. Tes t nyang meupasang dipakek untuk membandingkan suhu ngon pH ie jiep seugolom ngon lheuh penambahan NaHS. Gadeh H2S lam larutan nyang mengandung NaHS dihitong seubagoe persentase penurunan dari pengambilan dasar, ngon untuk menilai peu gadoh nyan signifikan secara statistik, kamoe meulakukan ANOVA pengukuran meulang saboh arah nyang diikuti le tes perbandingan multipel Dunnett. Geutah tuboh, urea serum, kreatinin serum, ngon total sulfida serum dari watee u watee dipeubandeng antara kontrol ngon tikoh nyang dirawat NaHS dari jeuneh keulamin nyang beda dipakek ANOVA campuran dua arah (antara-dalam) nyang di ikot le tes post hoc Bonferroni. Nilai P dua ekor < 0,05 dianggap signifikan secara statistik.
PH ie jiep nakeuh 7,60 ± 0,01 sigohlom geutamah NaHS ngon 7,71 ± 0,03 lheuh geutamah NaHS (n = 13, p = 0,0029). Suhu ie jiep nakeuh 26,5 ± 0,2 dan meunuron jeut keu 26,2 ± 0,2 lheuh ditambahkan NaHS (n = 13, p = 0,0128). Siapkan larutan NaHS 30 μM lam ie jiep dan simpan lam botol ie. Larutan NaHS hana stabil ngon konsentrasi jih meunuron dari watee u watee. Bak watee geucok sampel dari takue botol ie, na penurunan nyang signifikan (68,0%) lam sijeum phon, dan kandungan NaHS lam larutan nyan meunuron 72% dan 75% lheuh 12 dan 24 jeum. Lam sampel nyang dipeugot dari botol ie, pengurangan NaHS hana signifikan sampoe 2 jeum, tapi lheuh 12 dan 24 jeum ka meunuron 47% dan 72%. Data nyoe menunjukkan bahwa persentase NaHS lam larutan 30 μM nyang disiapkan lam ie jiep ka meunuron jeut keu kira-kira siperpeut dari nilai awai lheuh 24 jam, hana peureulee teumpat cok sampel (Gambar 1).
Stabilitas larutan NaHS (30 μM) lam ie jiep lam botol tikus/tikoh. Lheueh geupeusiap larutan, geucok sampel dari ujong ngon bagian dalam botol ie. Data geupeuleumah seubagoe rata-rata ± SD (n = 6/kelompok). * dan #, P < 0,05 dibandengkan deungon watee 0. Foto botol ie nyan deuh ujong (deungon bukaan) dan tuboh botol. Volume ujong jih kira-kira 740 μL.
Konsentrasi NaHS lam larutan 30 μM nyang baroe disiapkan nakeuh 30,3 ± 0,4 μM (rentang: 28,7–31,9 μM, n = 12). Teuma lheuh 24 h, konsentrasi NaHS meunuron jeut keu nilai nyang leubeh miyup (rata-rata: 3,0 ± 0,6 μM). Lagee nyang deuh bak Gambar 2, konsentrasi NaHS nyang dipeuhah le tikus hana konstan lam masa penelitian.
Beurat tuboh tikoh inong meutamah signifikan dari watee u watee (dari 205,2 ± 5,2 g jeut keu 213,8 ​​± 7,0 g bak kelompok kontrol dan dari 204,0 ± 8,6 g jeut keu 211,8 ± 7,5 g bak kelompok nyang dirawat NaHS); namun, pengobatan NaHS hana pengaroh bak berat badan (Gbr. 3). Beurat tuboh tikoh agam meutamah signifikan dari watee u watee (dari 338,6 ± 8,3 g jeut keu 352,4 ± 6,0 g bak kelompok kontrol dan dari 352,4 ± 5,9 g jeut keu 363,2 ± 4,3 g bak kelompok nyang dirawat NaHS); namun, pengobatan NaHS hana pengaroh bak berat badan (Gbr. 3).
Perubahan brat tuboh bak tikus inong ngon agam lheuh geubri NaHS (30 μM). Data dipeuleumah seubagoe rata-rata ± SEM dan dipeubandeng deungon dipakek analisis varians campuran dua arah (lam-antara) deungon tes post hoc Bonferroni. n = 5 dari tiep-tiep jeuneh keulamin lam tiep-tiep kelompok.
Konsentrasi urea ngon kreatin fosfat serum sebandeng bak tikoh kontrol ngon nyang dirawat ngen NaSH seupanyang penelitian. Seulaen nyan, pengobatan NaSH hana mempengaruhi konsentrasi urea ngon kreatinkrom serum (Tabel 1).
Konsentrasi total sulfida serum dasar sebandeng antara kontrol ngon tikus agam nyang dirawat NaHS (8,1 ± 0,5 μM vs 9,3 ± 0,2 μM) ngon tikus inong (9,1 ± 1,0 μM vs 6,1 ± 1,1 μM). Pemberian NaHS seulama 14 uroe hana pengaroh bak kadar total sulfida serum bak tikus agam atawa inong (Gbr. 4).
Perubahan konsentrasi sulfida total serum bak tikoh agam ngon inong lheuh geubri NaHS (30 μM). Data dipeuleumah seubagoe rata-rata ± SEM dan dipeubandeng deungon dipakek analisis varians campuran dua arah (dalam-dalam) deungon tes post hoc Bonferroni. Tiëp-tiëp jeunèh, n = 5/kelompok.
Kesimpulan utama dari penelitian nyoe nakeuh bahwa ie jiep nyang na NaHS hana stabil: hanya sekitar seperpeut dari total kandungan sulfida awai nyang jeut dideteksi 24 jam lheuh dicok sampel dari ujong dan lam botol ie tikus/tikoh. Seulaen nyan, tikoh keunong konsentrasi NaHS nyang hana stabil kareuna gadoh H2S lam larutan NaHS, ngon penambahan NaHS lam ie jiep hana meupeungaroh keu brat tuboh, urea serum ngon kreatin kromium, atawa total serum sulfida.
Lam penelitian nyoe, laju gadoh H2S dari larutan NaHS 30 μM nyang disiapkan lam ie jiep nakeuh kira-kira 3% per jam. Lam larutan penyangga (100 μM natrium sulfida lam 10 mM PBS, pH 7,4), konsentrasi sulfida dilaporkan meunuron 7% dari watee u watee seulama 8 h11. Kamoe seugolom jih ka meupeutheun pemberian NaHS intraperitoneal deungon melaporkan bahwa tingkat gadoh sulfida dari larutan NaHS 54 μM lam ie jiep nakeuh kira-kira 2,3% per jam (4%/jam lam 12 h phon dan 1,4%/jam lam 12 h terakhir lheuh persiapan)8. Studi seugolom jih43 meuteumee gadeh H2S nyang konstan dari larutan NaHS, terutama kareuna volatilisasi ngon oksidasi. Bahkan hana penambahan gelembung, sulfida lam larutan stok bagah gadeh kareuna volatilisasi H2S11. Studi kaleuh meutunyok bahwa seulama proses pengenceran, nyang dibutuhkan watee sekitar 30-60 detik, sekitar 5-10% H2S gadeh kareuna penguapan6. Untuk mencegah penguapan H2S dari larutan, para peneliti ka geucok padum-padum boh langkah, termasuk pengadukan lembut larutan12, geutop larutan stok ngon film plastik6, dan meminimalkan paparan larutan keu udara, kareuna laju penguapan H2S tergantung bak antarmuka udara-cairan me.13 Spontane ofS2 ion, terutama beuso besi, nyang merupakan kotoran lam ie.13 Oksidasi H2S menghasekan pembentukan polisulfida (atom belerang nyang dihubongkan uleh ikatan kovalen)11. Untuk meuhindari oksidasi jih, larutan nyang mengandung H2S disiapkan lam pelarut deoksigenasi44,45 dan lheuh nyan dibersihkan deungon argon atawa nitrogen seulama 20-30 mnt untuk memastikan deoksigenasi. autoksidasi lam larutan aerobik. Deungon hana DTPA, tingkat autoksidasi HS- nakeuh kira-kira 50% seulama kira-kira 3 j bak suhu 25°C37,47. Seulaen nyan, kareuna oksidasi 1e-sulfida dikatalisis le cahaya ultraviolet, larutan nyan haroh dikubah di ateuh es ngon dilindong dari cahaya11.
Lagee nyang deuh bak Gambar 5, NaHS meudisosiasi jeut keu Na+ ngon HS-6 watee meularut lam ie; disosiasi nyoe geutentukan le pK1 dari reaksi, nyang meugantung bak suhu: pK1 = 3,122 + 1132/T, di pat T berkisar dari 5 sampoe 30°C ngon geu uko lam derajat Kelvin (K), K = °C + 273,1548. HS- na pK2 nyang manyang (pK2 = 19), jadi bak pH < 96,49, S2- hana teubeuntuk atawa teubeuntuk lam jumlah nyang that ubit. Seubalek jih, HS- bertindak seubagoe basa ngon menerima H+ dari molekul H2O, ngon H2O bertindak seubagoe asam ngon diubah jeuet keu H2S ngon OH-.
Pembentukan gas H2S nyang ka terlarut lam larutan NaHS (30 μM). aq, larutan nyang na ie; g, gah; l, cair. Mandum hitongan geuanggap bahwa pH ie = 7,0 ngon suhu ie = 20 °C. Dipeugot ngon BioRender.com.
Meskipun na bukti bahwa larutan NaHS hana stabil, na padum-padum boh penelitian binatang ka geupake larutan NaHS lam ie jiep seubagoe senyawa donor H2S15,16,17,18,19,20,21,22,23,24,25,26 deungon durasi intervensi mulai dari 1 sampoe 21 minggu (table). Lam penelitian nyoe, larutan NaHS geupeubaroe tiep 12 j, 15, 17, 18, 24, 25 j atawa 24 j, 19, 20, 21, 22, 23 j. Hase kamoe menunjukkan bahwa tikoh terkena konsentrasi ubat yang hana stabil karena gadoh H2S dari larutan NaHS, dan kandungan NaHS lam ie jiep tikoh berfluktuasi secara signifikan seulama 12 atawa 24 h (kalon Gambar 2). Dua dari penelitian nyoe geulaporkan bahwa tingkat H2S lam ie teutap stabil seulama 24 j22 atawa hanya 2-3% kerugian H2S nyang diamati seulama 12 j15, tapi awak nyan hana geubri data pendukung atawa detail pengukuran. Dua boh penelitian ka geupeuleumah bahwa diameter ubit botol ie jeut meminimalkan penguapan H2S15,19. Namun, hasee kamoe menunjukkan bahwa hal nyoe mungken hanya menunda kehilangan H2S dari saboh botol ie 2 h daripada 12-24 h. Kedua penelitian nyan mencatat bahwa kamoe meuasumsikan bahwa kadar NaHS lam ie jiep hana berubah kareuna kamoe hana mengamati perubahan warna lam ie; oleh kareuna nyan, oksidasi H2S le udara hana signifikan19,20. Nyang hireuen, metode subjektif nyoe geunilai stabilitas NaHS lam ie nibak geu uko perubahan konsentrasi jih dari watee u watee.
Gadôh H2S lam larutan NaHS na hubôngan ngon pH ngon suhu. Lagee nyang dipeugah lam penelitian kamoe, meularutkan NaHS lam ie meuhasekan pembentukan larutan alkali50. Bak watee NaHS teularut lam ie, pembentukan gas H2S nyang teularut nyan meugantung bak nilai pH6. Seumaken miyub pH larutan, seumaken rayeuk proporsi NaHS nyang hadir seubagoe molekul gas H2S ngon seumaken le sulfida nyang gadeh dari larutan nyang na ie11. Hana meusaboh pih dari penelitian nyoe nyang geulaporkan pH ie jiep nyang dipakek seubagoe pelarut keu NaHS. Meunurot rekomendasi WHO, nyang geucok le sebagian rayeuk nanggroe, pH ie jiep haroih na lam kisaran 6,5–8,551. Lam rentang pH nyoe, tingkat oksidasi spontan H2S meuningkat kira-kira siploh go13. Meularutkan NaHS lam ie lam rentang pH nyoe akan meuhase konsentrasi gas H2S nyang ka terlarut 1 sampoe 22,5 μM, nyang menekankan peunteng jih memantau pH ie sigohlom melarutkan NaHS. Seulaen nyan, rentang suhu nyang dilaporkan lam penelitian di ateuh (18-26 °C) akan meuhasekan perubahan konsentrasi gas H2S nyang terlarut lam larutan kira-kira 10%, kareuna perubahan suhu merubah pK1, ngon perubahan ubeut lam pK1 jeut na dampak nyang signifikan ateuh konsentrasi gas H28 nyang terlarut. Seulaén nibak nyan, durasi nyang panyang nibak padum-padum boh penelitian (5 buleuen)22, nyang lam watee nyan variabilitas suhu nyang rayeuk geuharapkan, cit geupeuparah masalah nyoe.
Mandum penelitian kecuali saboh21 geupake larutan NaHS 30 μM lam ie jiep. Untuk geupeugah dosis nyang dipakek (yaitu 30 μM), padum-padum droe peunuleh geutunyok bahwa NaHS lam fase ie geupeuhase konsentrasi gas H2S nyang persis saban dan bahwa rentang fisiologis H2S nakeuh 10 sampoe 100 μM, sehingga dosis nyoe na lam rentang fisiologis15,16. Nyang laen geujelaskan bahwa 30 μM NaHS jeut geupeutheun tingkat H2S plasma lam rentang fisiologis, yaitu 5-300 μM19,20. Kamoe meuanggap konsentrasi NaHS lam ie 30 μM (pH = 7,0, T = 20 °C), nyang geungui lam padum-padum boh penelitian keu geumeurunoe efek H2S. Jeuet ta hitong bahwa konsentrasi gas H2S nyang ka terlarut nakeuh 14,7 μM, nyang na kira-kira 50% dari konsentrasi NaHS awai. Nilai nyoe saban ngon nilai nyang dihitong le peunuleh laen lam kondisi nyang saban13,48.
Lam penelitian kamoe, pemberian NaHS hana meu ubah brat tuboh; hase nyoe konsisten ngon hase penelitian laen bak tikoh agam22,23 ngon tikoh agam18; Namun, dua penelitian geulaporkan bahwa NaSH geupeupulihkan penurunan brat tuboh bak tikoh nefrektomi24,26, sedangkan penelitian laen hana geulaporkan efek pemberian NaSH bak brat tuboh15,16,17,19,20,21,25. Seulaen nyan, lam penelitian kamoe, pemberian NaSH hana mempengaruhi kadar urea serum dan kreatin kromium, nyang konsisten ngon hasee laporan laen25.
Penelitian nyan jiteume bahwa penambahan NaHS lam ie jiep seulama 2 minggu hana mempengaruhi konsentrasi total sulfida serum bak tikoh agam ngon inong. Temuan nyoe konsisten ngon hasee Sen et al. (16): 8 minggu pengobatan ngon 30 μM NaHS lam ie jiep hana mempengaruhi kadar sulfida plasma bak tikus kontrol; namun, awak nyan geulaporkan bahwa intervensi nyoe geupeupulihkan penurunan kadar H2S lam plasma tikoh nyang ka geu nefrektomi. Li dkk. (22) cit geulaporkan bahwa perawatan ngon 30 μM NaHS lam ie jiep seulama 5 buleun meningkatkan kadar sulfida bebas plasma bak tikoh nyang ka tuha sekitar 26%. Penelitian laen hana geulaporkan perubahan sulfida nyang beredar lheuh geutamah NaHS keu ie jiep.
Tujoh penelitian geulaporkan geupake Sigma NaHS15,16,19,20,21,22,23 tapi hana geubri detail leubeh lanjut teuntang ie hidrasi, dan limong penelitian hana geuseubot sumber NaHS nyang geupake lam metode persiapan awak nyan17,18,24,25,26. NaHS nakeuh molekul nyang terhidrasi ngon kandungan hidrasi ie jih jeuet bervariasi, nyang mempengaroh jumlah NaHS nyang dipeureulee untok meupeusiap larutan molaritas terteunte. Miseu jih, kandungan NaHS lam penelitian kamoe nakeuh NaHS•1,3 H2O. Deungon lagee nyan, konsentrasi NaHS nyang sebenar jih lam penelitian nyoe mungken leubeh miyup dari nyang dilaporkan.
“Pakriban senyawa nyang umu jih paneuk lagee nyan jeut na efek nyang trep lagee nyan?” Pozgay et al.21 geutanyong pertanyaan nyoe watee geuevaluasi efek NaHS ateuh kolitis bak tikoh. Awak nyan meuharap bahwa penelitian ukeu jeut menjaweub pertanyaan nyo ngon berspekulasi bahwa larutan NaHS mungken mengandung polisulfida nyang leubeh stabil seulaen H2S ngon disulfida nyang mediasi efek NaHS21. Kemungkenan laen adalah bahwa konsentrasi NaHS nyang that miyub nyang teusisa lam larutan mungken cit na efek nyang meuuntongkan. Bahkan, Olson dkk. geubri bukti bahwa kadar H2S mikromolar lam darah hana fisiologis ngon haroh na lam rentang nanomolar atawa hana sama sekali13. H2S jeut bertindak melalui sulfatasi protein, modifikasi pasca translasi nyang jeut dipeubalek nyang mempengaruhi fungsi, stabilitas, ngon lokalisasi le protein. Bahkan, lam kondisi fisiologis, kira-kira 10% sampoe 25% dari le protein hate nyang tersulfilat53. Kedua penelitian nyan mengakui kehancuran bagah NaHS19,23 tapi mengejutkan menyatakan bahwa "kamoe mengontrol konsentrasi NaHS lam ie jiep deungon menggantoe jih tiep uroe."23 Saboh penelitian secara hana sengaja menyatakan bahwa "NaHS adalah donor H2S standar dan umum jih dipakek lam praktek klinis untuk menggantikan H2S nyan keudroe."
Peugah haba di ateuh geupeuleumah bahwa NaHS gadeh dari larutan rot volatilisasi, oksidasi ngon fotolisis, ngon kareuna nyan na padum-padum boh saran nyang geupeugot keu geupeukureueng gadeh H2S dari larutan. Phon, penguapan H2S meugantung bak antarmuka gas-cair13 ngon pH larutan11; oleh kareuna nyan, untuk meminimalkan gadoh penguapan, takue botol ie jeut dipeugot seubit mungken lagee nyang ka dipeugah dilee15,19, dan pH ie jeut disesuaikan keu bataih ateuh nyang jeut diteurimong (yaitu, 6,5–8,551) untuk meminimalkan gadoh penguapan11. Keudua, oksidasi spontan H2S teujadi kareuna efek oksigen ngon na ion logam transisi lam ie jiep13, sehingga deoksigenasi ie jiep ngon argon atawa nitrogen44,45 ngon penggunaan chelator logam37,47 jeut mengurangi oksidasi sulfida. Keulhee, untuk tapeutheun fotodekomposisi H2S, botol ie jeut ta bungkôh ngon aluminium foil; Praktek nyoe berlaku cit keu bahan nyang peka cahaya lagee streptozotocin55. Nyang keuneulheueh, garam sulfida anorganik (NaHS, Na2S, ngon CaS) jeuet geubri rot gavage nibak geularut lam ie jiep lagee nyang ka geulaporkan seugolom jih56,57,58; penelitian ka geutunyok bahwa natrium sulfida radioaktif nyang geubri melalui gavage keu tikoh geuserap ngon get ngon geudistribusikan keu karap mandum jaringan59. Sampoe saat nyoe, sebagian rayeuk penelitian ka geubri garam sulfida anorganik secara intraperitoneal; namun, rute nyoe jarang dipakek lam pengaturan klinis60. Di sisi laen, jalur oral nakeuh jalur administrasi nyang paleng umum dan leubeh geupileh bak manusia61. Kareuna nyan, kamoe meusarankan untuk meuevaluasi efek donor H2S bak tikus ngon cara gavage oral.
Saboh batasan nakeuh kamoe meu uko sulfida lam larutan ie ngon serum ngon cara MB. Metode untuk meuko sulfida meliputi titrasi yodium, spektrofotometri, metode elektrokimia (potensiometri, amperometri, metode kuulometrik ngen metode amperometrik) ngen kromatografi (kromatografi gas ngen kromatografi cair berkinerja tinggi), di antara jih metode spektrofotometri MB2 yeng paleng umum dipakek. Saboh batasan dari metode MB keu geu uko H2S lam sampel biologis nakeuh geu uko mandum senyawa nyang mengandung belerang dan hana bebas H2S63 kareuna geupeugot lam kondisi asam, nyang geu peuhase ekstraksi belerang dari sumber biologis64. Namun, meunurot Asosiasi Kesehatan Masyarakat Amerika, MB nakeuh metode standar untuk geu uko sulfida lam ie65. Kareuna nyan, keterbatasan nyoe hana mempengaruhi hasee utama kamoe ateuh ketidakstabilan larutan nyang mengandung NaHS. Seulaen nyan, lam penelitian kamoe, pemulihan pengukuran sulfida lam sampel ie ngon serum nyang mengandung NaHS nakeuh 91% ngon 93%. Nilai-nilai nyo seusuai ngen rentang yeng dilaporkan sigolom jih (77-92)66, menunjukkan presisi analitis yeng jeut diterimong42. Perle ta perhatikan bahwa kamoe pakek tikoh agam ngon inong sesuai ngen pedoman National Institutes of Health (NIH) untuk tapeujioh ketergantungan nyang berlebihan bak studi binatang nyang hanya agam lam studi praklinikal67 ngon untuk tapeutamong tikoh agam ngon inong meunyo mungken68. Point nyoe ka geu teukankan le ureung laen69,70,71.
Lam kesimpulan, hasee dari penelitian nyoe menunjukkan bahwa larutan NaHS nyang disiapkan dari ie jiep hana jeut dipakek untuk menghasilkan H2S kareuna hana stabil jih. Jalur administrasi nyoe akan geupeudeuh binatang keu tingkat NaHS nyang hana stabil dan leubeh miyup dari nyang geuharapkan; oleh kareuna nyan, temuan-temuan nyan mungken hana berlaku keu manusia.
Dataset nyang dipakek dan/atau dianalisis seulama penelitian saat nyoe na dari peunuleh nyang sesuai ateuh permintaan nyang masuk akal.
Szabo, K. Gareh watee penelitian hidrogen sulfida (H2S): dari racon lingkungan sampoe mediator biologis. Biokimia ngon Farmakologi 149, 5-19. 2017 (2018).
Abe, K. ngon Kimura, H. Kemungkenan peran hidrogen sulfida seubagoe neuromodulator endogen. Jurnal ilme saraf, 16, 1066-1071. 1996 (1996).
Peran fisiologis hidrogen sulfida lam sel, jaringan ngon organ mamalia. Tinjauan lam fisiologi ngon biologi molekuler 103, 31-276. 10.1152/fisirev.00028.2021 (2023).
Dillon, KM, Carrazzone, RJ, Matson, JB, ngon Kashfi, K. Janji sistem peutamong seluler nyang berkembang keu nitrat oksida ngon hidrogen sulfida: era baroe kedokteran pribadi. Biokimia ngon Farmakologi 176, 113931. (2020).
Mata Uroe, X., dan laen-laen. Peugot jangka panyang donor hidrogen sulfida nyang geupeuleupah lambat jeut geucegah luka iskemia/reperfusi miokard. Laporan ilmiah 7, 3541. Bak saboh teumpat nyang geungui 2017.
Fosforilasi saluran BK mengatue sensitivitas hidrogen sulfida (H2S). Batas-batas lam Fisiologi 5, 431. (2014).
Hidrogen sulfida meningkatkan aktivitas saluran kalium (BK) nyang diaktifkan kalsium lam sel tumor hipofisis tikoh. Arsitek. Plueger. 459, 389-397. 2010 (2010).
Jeddy, S., dan laen-laen. Hidrogen sulfida geupeutingkat efek peulindong nitrit ateuh luka iskemia-reperfusi miokard bak tikoh diabetes tipe 2. Oksida Nitrat 124, 15-23. 10.1016/j.niox.2022.04.004 (2022).
Korvino, A., dan laen-laen. Tren kimia donor H2S ngon dampak jih keu peunyaket kardiovaskular. Antioksidan 10, 429. Bak thon 2021.
Deleon, ER, Stoy, GF, ngon Olson, KR (2012). Gadeh pasif hidrogen sulfida lam percobaan biologis. Biokimia analitis 421, 203-207. 10.1016/j.ab.2011.10.016 (2012).
Nagy, P., dan laen-laen. Aspek kimia dari pengukuran hidrogen sulfida lam sampel fisiologis. Akta biokimia ngen biofisika 1840, 876-891. 10.1016/j.bbagen.2013.05.037 (2014).
Line, LL.D. Penentuan spektrofotometri hidrogen sulfida lam ie alam. Limnol. Samudra. 14, 454-458. 1969.14.3.0454 (1969).
Olson, KR (2012). Peulatihan praktek lam bideuëng kimia ngon biologi hidrogen sulfida. “Antioksidan nyan.” Peusinyalan Redoks. 17, 32-44. 10.1089/ars.2011.4401 (2012).